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天天彩票>技术文章>Pristane诱导BALB/c狼疮鼠模型

(1)复制方法  10周龄雌性BALB/c小鼠,经其腹腔一次性注射降植烷(2,6,10,14-tetramethylpentadecane, Pristane,)0.5ml,然后小鼠常规饲养,自由饮水和进食。在小鼠注射Pristane前及注射后每月作一次小鼠尿蛋白测定,依据反应区显色程度判断尿蛋白阴性(-):0mg/L;(±):150~300mg/L;(+):300mg/L;(++):1000mg/L);(+++):3000mg/L;(++++);>20000mg/L。注射前、注射后2周及每月一次尾静脉取血作血清ANA与抗 dsDNA抗体测定。ANA测定使用包被人喉癌上皮细胞(human epithelial tumor Line, Hep-2)、猴肝冰冻切片的双抗原片,抗dsDNA抗体测定采用包被绿蝇短膜虫抗原片。反应区加入不同稀释度的待测血清25μl,并设阴性及阳性血清对照,室温反应30min,用PBS冲洗1s后再用PBS浸泡10min;加入1:50稀释的50μl异硫氰酸荧光素(FITC)-标记的兔抗鼠Ig抗体,室温反应30min;然后再用PBS冲洗1s,PBS浸泡10min;甘油封片,置荧光显微镜下观察。 ANA检测结果判断:低于1:100血清稀释度无可见荧光核型,结果为阴性;1:100或更高血清稀释度可见荧光核型,结果为阳性。抗dsDNA抗体检测结果判断:绿蝇短膜虫动基体没有荧光,结果阴性;仅细胞核或基体(鞭毛的基体)或胞浆出现荧光结果亦为阴性。绿蝇短膜虫动基体可见清晰的均质型、部分环状的荧光,与阳性对照血清所见的荧光模型相同,结果为阳性。注射后8个月时处死动物。取小鼠肾脏于40g/L多聚甲醛固定72h,作常规组织切片,HE染色,光镜下观察。

(2)模型特点  肉眼观察大多数模型小鼠的腹腔内可见各脏器根部、肠系膜上附有点状或块状物质,白色质硬,病理切片证实为反应性增生、钙化,中心为注射的pristane,周围有大量脂肪细胞和炎性细胞层层包围;个别小鼠可见脾脏肿大及出现大量腹水。注射后1个月模型小鼠开始出现蛋白尿,多为±或+;蛋白尿的阳性率和尿蛋白量呈渐进性增加,至8个月时有62.5%的小鼠出现不同程度的尿蛋白。注射后3个月时模型小鼠即可出现ANA,8个月时ANA阳性率达87.5%,滴度范围为1:100~1:3200,核型以斑点型、核仁型、均质型为主。注射后4个月时模型小鼠开始出现抗 dsDNA抗体,但滴度较低,至5个月时滴度和阳性率明显提高;8个月时,阳性率可达47.8%,滴度为1:10~1:100。镜下病理组织学观察显示,模型动物肾脏HE染色切片中部分肾小球体积增大,毛细血管襻细胞增生、层数增多,球囊壁增厚,个别肾球囊与球内细胞间隙消失;部分肾小管上皮细胞增生并可见水样变性,胞核嗜酸性染色增强,管腔内可见蛋白管型;间质有散在淋巴细胞浸润及纤维组织增生。免疫荧光染色显示,模型小鼠肾小球系膜毛细血管襻可见免疫复合物沉积,荧光分布呈连续性,肾小球轮廓清晰。抗dsDNA抗体与蛋白尿之间存在相关性。模型制作方法简便,条件容易控制,动物死亡率低,患病时间较长,模型病理特征较为明显。

(3)比较医学  临床上系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)病因较为复杂,治疗效果不佳,易反复发作,有的致死率。通常认为,本病发生与遗传、环境、性激素、感染等因素相互作用有关,其中遗传因素占主要地位。由于SLE动物模型是研究本病的发病原因、发病机制及临床治疗的重要手段,以往研究报道已通过遗传性狼疮鼠模型的建立,从基因水平证实了遗传因素的致病性。近年来,有研究通过在非自身免疫性小鼠如SJL、BALB/c ByJ、 C57BL等小鼠品系中使用异十八烷、姥鲛烷、降植烷(Pristane)一次性腹腔内注射,发现SJL小鼠无抗dsDNA抗体出现,也无抗核内核糖体蛋白/Sm抗原(mRNP/Sm)抗体出现,却出现了抗核糖体蛋白(RibP)抗体,其肾脏损害类似人类狼疮性肾炎的病理变化;而BALB/c ByJ小鼠则产生了狼疮非特异性及特异性自身抗体(ANA、抗nRN P/Sm抗体),出现免疫复合物性肾小球肾炎及关节炎。证实采用一次性腹腔注射Pristane的方法建立的SLE动物模型,与其他化学药物诱导的SLE动物模型相比临床特征为典型;本方法复制的模型包括从临床、免疫学及病理学方面均与人类 SLE相似,是目前较为理想的SLE动物模型。

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