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天天彩票>技术文章>(EAE)动物模型

反应性脑脊髓炎动物的症状、病理改变及免疫学特征与人类的脱髓鞘疾病如:多发性硬化症(multiple sclerosis, MS)、急性播散性脑脊髓炎相似,常被看作是这类疾病的动物模型。Rivers等于1933年采用多次肌肉注射兔脑提取物的方法,次成功建立了反应脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)模型。随后 Morgan和Kabat又把福氏佐剂(Freund adjuvant, FA)引入到EAE的建立过程中,即把抗原与福氏佐剂混合制成乳剂,单次免疫即可成功诱发EAE。这不但简化了EAE的建立过程,而且地提高了模型的可靠性。为研究MS的发病机制、治疗和预防复发创造了有利的条件。

反应性脑脊髓炎动物模型(Model of allergic encephalomyelitis in rats)

(1)复制方法  Wistar大鼠,体重为200~220g。新鲜牛脊髓60g(也可取新鲜羊脑白质200g),去除筋膜和血管,剪碎,加入适量预冷的氯丨仿;甲醇(2:1)溶液,高速组织分散器匀浆后加氯丨仿;甲醇(2:1)溶液至620ml,4℃冰箱电动搅拌12h,用布氏漏斗加滤纸抽滤,在未抽干前加310m舍离断仿;甲醇(2:1)溶液电动搅拌2h,抽滤,如此抽滤2次。沉渣加310ml -20℃预冷丙酮搅拌2h,抽滤2次。沉渣加入620ml双蒸馏水中,电动搅拌12h,抽滤两次,沉渣溶于100ml双蒸馏水中,0.5mol/L HCl调pH至3.0,冰箱中搅拌1h,4℃1500r/min,离心60min,取上清液置透析袋中过夜。以考马斯亮蓝法测定髓鞘碱性蛋白(MBP)含量为3.2g/L,用真空冷冻干燥机将MBP的粗提品干燥,得粗品 MBP(约75mg)。

用鲍金氏培养基35℃温箱培养百日咳杆菌,5d后收集菌落,菌液58℃水浴40min灭活细菌,用比浊管比浊法测得百日咳杆菌浓度为60×10的12次方/L。MBP粗提品溶于3ml生理盐水中与3ml福氏佐剂(卡介苗含量33mg)混合成油包水乳剂,大鼠于双后足垫皮内分别注射0.3ml油包水乳剂和0.1ml百日咳杆菌。注射当天定为0d,每日称重并观察动物的神经症状。EAE的严重程度依据Knono等的标准评定。根据实验进程需要分别取不同病变时期的实验的鼠脑和脊髓组织,用10%的甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色。

(2)模型特点  实验组大鼠注射抗原后精神萎靡、食欲减退、体重逐渐下降。部分动物自第8日开始出现EAE明显症状:尾部张力下降,继而尾部张力消失。继尾部张力消失后出现单侧后肢及双侧后肢无力,继而单侧及双侧后肢瘫痪,人为翻身后不能恢复姿态,严重者四肢瘫痪,个别动物因丨病情严重而死亡。动物发病的高峰期为注射抗原后10~15d,表现为一次性急性发病过程,严重者四肢瘫痪、死亡。组织学检查光镜下可见,EAE大鼠的脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润,炎性细胞聚集在血管周围呈现袖套样改变。存活者症状可逐渐缓解,体重逐渐恢复,约在注射抗原30d后可恢复。

(3)比较医学  作为MS的动物模型,EAE为MS发病机制的研究提供了便利条件。有些动物模型因丨病情严重而死亡。此模型发病率高且病情严重的原因可能有以下两方面:一是抗原MBP用量大(3mg/只)。MBP为诱发EAE的主要抗原物质,研究表明,MBP可激活体内Th1+细胞,使之穿过血脑屏障,攻击自身神经髓鞘的MBP,从而导致神经细胞脱髓鞘,引起 EAE或MS;二是采用新培养的百日咳杆菌效果好于成品的百日咳疫苗。百日咳杆菌的毒素可增加血管的通透性,使致敏的T细胞易于通过血脑屏障攻击神经髓鞘。该模型利用易获得的牛脊髓MBP的粗提品,诱导的大鼠EAE模型,发病率高,病情典型,为MS的研究提供了一个良好的模型。

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