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产品介绍

小鼠肝细胞原代培养

功能
1肝脏是能量代谢、外源性化学物质生物转化和血浆蛋白合成重要的器官。
2体外培养的
小鼠肝细胞原代培养可进行细胞移植、基因治疗

特性
1组织来源于正常小鼠肝脏组织。
2鉴定:albumin, Cytokeratin-18 and Vimentin免疫荧光染色。
3推荐使用小鼠肝细胞专用培养基(本公司可订购)
4经检测不含HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
5该细胞只用于科研

运输
新鲜活细胞运输或冻存细胞干冰运输

保存及应用
如是新鲜原代细胞,请于收到后放入CO2培养箱内静置2-3h后再进行实验操作;如是冻存细胞,收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可进行复苏操作。

操作步骤:
培养基的配置:基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置:DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置  移液器1套(2.5μl、20μl、200μl、1ml),酒精灯1盏,液器1台,斜架1台,酒精喷壶1个,酒精棉球缸1个,污缸1个, 常规耗材:培养瓶(50㎝2),定量移液管(5ml、10ml),枪头(1ml、200μl、10μl),培养皿,6/24/48/96孔板,医用脱脂棉球,保种管  所需试剂:gibco高糖培养基,胎牛血清,双抗,DMSO,胰酶,苯扎溴氨,75%酒精……  实验前准备:  所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内,用酒精喷壶喷洒实验台面,小鼠肝细胞并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。  次传代前细胞的复苏,先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边,待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
细胞培养应注意的问题:       
细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以小鼠肝细胞无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。
冷冻保存细胞之方法:
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。  冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度:
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial,融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
应如何避免细胞污染:
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之好方法。

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