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细胞划痕试验是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

基本步骤:“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

步骤

一.准备:
能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

二.流程:
1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过12小时能铺满。
3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。

特点:1,在程度上模拟了体内细胞迁移的过程。
      2, 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。
      3,与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。
      4,研究细胞迁移的体外实验中简单的方法。
  
传统方法:细胞融合后,用枪头在细胞层表面制造划痕
方法缺陷:人工制造的“划痕”很难一致性,重复性差。

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