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细胞转染

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因为不同的细胞在生理代谢及分裂上均存在差异,因此研究者将外源遗传物质导, 入细胞的过程中需要选择
不同的方式。目前,将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类:
1、脂质体(或是脂质体替代物)转染;
2、电转;
3、病毒感染。
这三种方法互有优劣。脂质体或是脂质体替代物转染操作简便,价格低廉, 但是对细胞毒性大。而且,有
些细胞通过脂质体转染效率很低,电转操作方便快捷,但是需要专门的仪器,对细胞损伤也比较大;病毒
感染克服了前两者的劣势,感染效率高,对细胞毒性小,但是病毒前期包装需更大量的时间和精力。
实验操作流程:
1.转染试剂的准备
a.将400u去核酸酶水加入管中,靂荡10秒钟,溶解脂状物。
b.震荡后将试剂放在- 20摄氏度保存,使用前还需需荡。
2。选择合适的混合比例(1: 1-1: 2脂质体[1体积: DNA质量来转染细胞。在一个转染管中加入合适体
积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的ONA,電荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震
荡。
3、将混合液在室温放置10-15分钟。
4、吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗- -次。
5、加入混合液,将细胞放回培养箱中培养-个小时。
6.到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24- 48小时。
 

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